目的:探讨二甲双胍对异丙肾上腺素(ISO)诱导的H9C2心肌细胞肥大的作用,并阐明其可能的分子机制.方法:培养H9C2细胞,采用50 μmol·L-1 ISO干预H9C2细胞建立心肌细胞肥大模型作为ISO组;不予处理的细胞作为对照组.Western blotting法检测2组H9C2心肌细胞中脑钠肽(BNP)蛋白表达水平.将H9C2心肌细胞分为对照组、ISO组、ISO+二甲双胍组和二甲双胍组.采用CCK-8法检测各组H9C2细胞活力,选取二甲双胍的最佳药物干预浓度和时间,采用结晶紫染色观察各组H9C2心肌细胞形态表现和横截面积,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中心房钠尿肽(ANP)mRNA表达水平,线粒体荧光探针观察各组细胞中线粒体形态表现,Western blotting法检测各组细胞中线粒体融合标志性蛋白神经萎缩蛋白 1(OPA1)和线粒体融合蛋白(MFN)2蛋白表达水平.结果:与对照组比较,ISO 组H9C2心肌细胞横截面积增加(P<0.05),细胞中BNP蛋白表达水平升高(P<0.05),提 示 心 肌 细 胞 肥 大 模 型 造 模 成 功.CCK-8 法 检测,2 mmol·L-1 二甲双胍作用 8 h时细胞活力恢复效果最佳.RT-qPCR法检测,与对照组比较,ISO组细胞中ANP mRNA表达水平升高(P<0.05);与ISO组比较,二甲双胍+ISO组和二甲双胍组细胞中ANP mRNA表达水平降低(P<0.05).线粒体荧光探针观察,对照组细胞中线粒体呈绿色荧光,多为短棒状,少数线粒体丝线状相连;与对照组比较,ISO组H9C2细胞中点状线粒体明显增加,ISO+二甲双胍组和二甲双胍组细胞中点状线粒体明显减少.Western blotting法检测,与对照组比较,ISO组细胞中OPA1和MFN2蛋白表达水平降低(P<0.05);与ISO组比较,ISO+二甲双胍组和二甲双胍组细胞中OPA1和MFN2蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:二甲双胍可改善ISO诱导的H9C2心肌细胞肥大,其机制可能与其上调OPA1和MFN2蛋白表达及促进线粒体融合有关.
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(CDKL1)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和转移的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:选择乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用小干扰RNA技术(siRNA)沉默CDKL1基因表达.采用 1 μmol·L-1 磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑制剂BpV或10 μmol·L-1 蛋白激酶B(Akt)激动剂SC79进行干预.取对数生长期MCF-7细胞,分为空白对照组(MCF-7细胞不作任何处理)、转染对照(siRNA-NC)组(MCF-7细胞转染siRNA-NC质粒)、siRNA-CDKL1 组(MCF-7 细胞转染 siRNA-CDKL1 质粒)、siRNA-CDKL1+ PTEN抑制剂BpV(siRNA-CDKL1+BpV)组(转染 siRNA-CDKL1 的 MCF-7 细 胞,再 采 用1 μmol·L-1 PTEN抑制剂 BpV处理 2 h)和 siRNA-CDKL1+Akt激动剂 SC79(siRNA-CDKL1+ SC79)组(转染siRNA CDKL1的MCF-7细胞,再采用10 μmol·L-1 Akt激动剂SC79处理2 h).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性,EdU法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中EdU阳性细胞率,细胞划痕愈合实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、PTEN、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平.结果:与siRNA-NC组比较,siRNA-CDKL1组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),EdU阳性细胞率降低(P<0.01),乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭细胞数降低(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01).与siRNA-CDKL1组比较,siRNA-CDKL1+BpV组和siRNA-CDKL1+SC79组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性升高(P<0.01),EdU阳性细胞率升高(P<0.01),迁移和侵袭细胞数增加(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平升高(P<0.01),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.01).结论:CDKL1基因的沉默可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和转移能力,其作用机制可能与调控PTEN/Akt/mTOR信号通路有关.
目的:探讨外源性CXC趋化因子配体 10(CXCL10)对肝细胞癌(HCC)SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响,并阐明其作用机制.方法:按照CXCL10作用浓度,将人HCC SMMC-7721细胞分为0 mg·L-1 CXCL10组、10 mg·L-1 CXCL10组和30 mg·L-1 CXCL10组.上述部分细胞给予细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059(80 μmol·L-1)后,将SMMC-7721细胞分为 0 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组、10 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组 和 30 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组.CCK-8法检测各组SMMC-7721细胞增殖率,EdU法检测各组SMMC-7721细胞中EdU阳性表达率,Transwell小室实验检测各组SMMC-7721细胞迁移率,Western blotting法检测各组SMMC-7721细胞中ERK、磷酸化ERK(p-ERK)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达水平.结果:CCK-8法检测,培养 24 h后,与 0 mg·L-1 CXCL10 组比较,10 mg·L-1 CXCL10 和 30 mg·L-1 CXCL10 组SMMC-7721细胞增殖率升高(P<0.05或P<0.01).EdU法检测,与 0 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10 和 30 mg·L-1 CXCL10 组 SMMC-7721 细胞中 EdU 阳性表达率升高(P<0.01);Transwell小室实验检测,培养 48 h后,与 0 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10和30 mg·L-1 CXCL10组SMMC-7721细胞迁移率升高(P<0.01).Western blotting法检测,细胞培养24 h后,采用CXCL10 溶液处理 24 h,与 0 mg·L-1 CXCL10 组比较,10 mg·L-1 CXCL10组和30 mg·L-1 CXCL10组SMMC-7721细胞中ERK、p-ERK及Cyclin D1蛋白表达水平升高(P<0.01).CCK-8法检测,加入ERK抑制剂PD98059后,与 0 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组和30 mg·L-1 CXCL10+PD98059组SMMC-7721细胞增殖率降低(P<0.05);与 10 mg·L-1 CXCL10组比较,10 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组 SMMC-7721 细胞增殖率降低(P<0.05);与30 mg·L-1 CXCL10 组比较,30 mg·L-1 CXCL10+PD98059 组SMMC-7721 细胞增殖率降低(P<0.05).结论:CXCL10 能够促进 HCC SMMC-7721 细胞增殖和迁移,其作用机制与上调 ERK/p-ERK/Cyclin D1通路蛋白表达有关.
目的:比较经尿道等离子前列腺剜除术(PKEP)和经尿道等离子前列腺切除术(PKRP)2种术式治疗良性前列腺增生(BPH)的临床疗效,为 BPH 的治疗方式选择提供依据.方法:收集60例因下尿路症状(LUTS)就诊且门诊初诊为BPH的患者的临床资料,在患者知情同意的情况下将患者随机分为PKEP组(采用PKEP进行治疗)和PKRP组(采用PKRP进行治疗),每组各30例.观察2组患者术前年龄、体质量、体质量指数(BMI)、总前列腺特异抗原(tPSA)水平、红细胞比容(HCT)、血红蛋白(Hb)水平、术前和术后钠离子水平、前列腺体积、中叶突入程度、并发症(高血压、糖尿病和呼吸系统疾病)发生率和口服5α还原酶抑制剂百分率,手术时间、术中出血量、切除组织体积、切除速率、切除效率,术后总住院时间、留置尿管时间、膀胱冲洗时间、术前和术后生活质量(QOL)评分及国际前列腺症状评分(IPSS),并比较2组患者术后不良反应发生情况.结果:2组患者术前年龄、体质量、BMI、tPSA水平、术前HCT、术前Hb水平、术前钠离子水平、前列腺体积和中叶突入程度比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者并发症(高血压、糖尿病和呼吸系统疾病)发生率和口服 5α还原酶抑制剂百分率比较差异无统计学意义(P>0.05);PKRP组患者术中出血量、切除组织体积、切除速率和切除效率高于PKRP组(P<0.05);2组患者总住院时间、术后留置尿管时间和术后膀胱冲洗时间比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者术前和术后钠离子水平、QOL评分和IPSS评分比较差异无统计学意义(P>0.05);2组患者术前和术后各自组内QOL评分及IPSS评分比较差异有统计学意义(P<0.05);PKEP组患者出现尿失禁1例,PKRP组患者出现尿失禁2例,未出现其他手术相关并发症.结论:2种术式疗效和安全性相似,均可获得满意的手术效果;PKEP术中患者出血量较少,腺体切除量、切除效率和切除速率较高,是治疗BPH的较好方法.
目的:观察度普利尤单抗治疗难治性特应性皮炎(AD)的疗效,为该类患者的治疗提供参考.方法:收集2例难治性重度AD患者应用度普利尤单抗治疗的临床资料和随访结果,结合相关文献复习,分析度普利尤单抗治疗难治性AD的疗效及安全性.结果:患者1,女性,30岁,双手背见密集充实丘疹,似皮肤淀粉样变改变,四肢及躯干散在红斑、丘疹伴瘙痒 25 年,并发过敏性鼻炎5年,诊断为成人重度AD,应用度普利尤单抗治疗16周后停药,皮损完全消退,随访至今未复发,过敏性鼻炎症状明显缓解,无须应用口服药.患者2,女性,59岁,全身暗红斑、丘疹和结节伴瘙痒10余年,曾多次住院治疗,既往应用环孢素、沙利度胺和激素治疗,效果不佳,诊断为成人重度AD,应用度普利尤至今,皮损基本消退.结论:度普利尤单抗对难治性AD有良好疗效且安全,患者生活质量改善,AD并发其他2型炎症驱动的过敏性疾病症状得到控制.
