丙泊酚通过促进小泛素化相关修饰蛋白1表达增加抑制神经母细胞瘤细胞系钙内流水平变化

目的立足于小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)化修饰这一蛋白质翻译后修饰的全新角度,通过研究丙泊酚对细胞蛋白SUMO化修饰和钙内流的变化探讨丙泊酚的全身麻醉机制。方法采用Western印迹法观察丙泊酚对神经母细胞瘤细胞系(SHSY5Y)SUMO1化水平变化的影响。并通过脂质体转染法将SUMO特异性蛋白酶(SENP)1导入3×Flag-SUMO1-SHSY5Y细胞系降低SUMO1化水平,以观察丙泊酚对细胞钙内流变化的影响。采用Fluo-3AM钙离子荧光测定法测定细胞内钙离子浓度。结果以50μmol/L丙泊酚分别孵育3×Flag-SUMO1-SHSY5Y细胞系0、30、60、120min,随着处理时间的延长,SUMO化水平升高,且与蛋白结合状态的SUMO增加,游离态SUMO减少。以5、10、25、50μmol/L丙泊酚孵育细胞60min,细胞蛋白SUMO化水平随丙泊酚浓度增加而升高。临床浓度丙泊酚(50μmol/L)引起细胞钙内流呈双向性变化,在加入丙泊酚的最初数分钟,细胞内钙离子迅速增加,约10~15min达到峰值,后逐渐降低,以45~60min为转折点,随后逐渐低于对照组,与细胞内SUMO化水平变化趋势相同。与0μmol/L相比,50、37.5、25μmol/L丙泊酚作用60min后细胞内钙离子荧光值显著降低(P值均<0.05),细胞内钙离子浓度明显受到抑制。转入野生型SENP1的细胞中丙泊酚(50μmol/L)对其钙内流影响的双向性消失,细胞内钙离子荧光值与溶剂对照组的差异无统计学意义(P>0.05);而在表达突变体SENP1和空载体的细胞中,丙泊酚对钙内流的抑制性影响仍然存在,细胞内钙离子荧光值均显著低于溶剂对照组(P值均<0.05)。结论丙泊酚通过诱导3×FlagSUMO1-SHSY5Y细胞系SUMO化水平表达增加抑制细胞钙内流变化,这也许是丙泊酚发挥抑制效应的全身麻醉机制之一。