华支睾吸虫Rap2B样基因的生物信息学分析及其克隆、表达

目的 从华支睾吸虫cDNA文库中筛选Rap2B样基因并分析其结构和功能,初步进行克隆和表达纯化,为进一步研究其功能奠定基础.方法 利用多种生物信息学分析软件,分析华支睾吸虫Rap2B蛋白的拓扑学结构、生物学和免疫学功能特征.设计引物,从华支睾cDNA质粒文库中扩增目的 基因cDNA序列,构建原核重组质粒并初步表达纯化.结果 华支睾吸虫Rap2B样基因长度为847bp ,其全长编码序列为426bp , 编码141个氨基酸,理论分子量是15851.1.重组的原核表达质粒pET-28a(+)-Rap2B经PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒构建成功.该基因在大肠杆菌中能高效表达.经His亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白,Western blotting证实Rap2B重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别.结论 华支睾吸虫Rap2B蛋白经生物信息学预测为ras原癌基因家族成员,可能在华支睾吸虫致癌过程中有一定作用.该基因可在原核表达系统中高效表达,并得到了纯化的重组蛋白,为进一步研究该蛋白的功能以及在致病尤其是可能促发肿瘤的作用方面奠定一定基础.