动物活体成像生物发光稳定细胞株的构建

目的:构建组成型表达萤光素酶基因的载体,建立稳定高表达萤光素酶的MCF-7乳腺癌细胞株,检测其对细胞增殖的影响及在传代后的表达效果。方法:以载体pGL4.20为模板,PCR扩增萤火虫萤光素酶基因,将其克隆到载体pIRESpuro2上,将获得的pIRESpuro2-Luc经酶切和测序验证后,转染293T、MCF-7及ZR75-1细胞,通过检测萤光素酶报告基因的活性,检测其表达效果;将萤光素酶基因表达载体转染MCF-7细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,用有限稀释法挑选高表达萤光素酶基因的单克隆细胞株,并检测其对细胞增殖的影响与传代后的表达效果。结果:测序结果表明构建了萤光素酶基因表达载体,活性测定证明了其表达效果;筛选到高表达萤光素酶基因的MCF-7稳定转染细胞株,分析表明其遗传稳定性良好,对细胞的增殖没有影响。结论:构建了高表达萤光素酶基因的MCF-7稳定转染细胞株。