电场强度对线性丙烯酰胺毛细管电泳特性的影响

使用2种不同质量分数(4%和6%)的线性聚丙烯酰胺(Linear Polyacrylamide,LPA)作为筛分介质,对片段长度为80～584bp的标准DNA样品进行毛细管电泳.利用激光诱导荧光方法检测信号,荧光染料为溴化乙啶.改变电场强度从100～375V/cm,得到电泳电流、迁移率、信号强度、半峰宽以及分辨率的变化曲线.实验测得电场强度与电流有很好的线性关系,非线性度参数γ分别为0.99944和0.99876.迁移率曲线与电场强度、DNA片段长度成复杂的函数关系,DNA的迁移率依赖于电场强度、筛分介质质量分数和片段长度;电场强度对信号强度的影响较小,筛分介质的质量分数对区带展宽有影响,因此也影响了信号强度,使用4%LPA比6%LPA区带展宽小,信号强度高,更适合分离片段长度≤600bp的DNA样品.电场强度对分辨率的影响十分复杂,增大电场强度并不能提高分辨率,为了提高分辨率,优化分离电场强度为125V/cm,理论分析对实验起到了很好的指导作用.