靶向Rab9GTPase基因shRNA体外抑制麻疹病毒Edmonston株复制的研究

目的:构建靶向Rab9 GTPase基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,观察shRNA对Rab9 GTPase表达和麻疹病毒Edmonston株体外复制的抑制效应.方法:按照shRNA的设计要求和Rab9 GTPase基因序列构建靶向Rab9 GTPase基因shRNA表达载体,表达载体经酶切鉴定和序列分析后通过脂质体法转染Vero-E6细胞,然后感染麻疹病毒Edmonston株,通过RT-PCR和Western blot检测转染细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达水平;通过标准蚀斑试验检测病毒滴度,观察shRNA对麻疹病毒Edmonston株复制的抑制效应.结果:靶向Rab9 GTPase基因的shRNA可特异性抑制Vero-E6细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达,最大抑制率分别为(86.3±0.7)%和(87.6±0.7)%;蚀斑试验检测Rab9 GTPase基因表达沉默后对麻疹病毒Edmonston株体外复制抑制率达90%以上,且抑制效应至少可持续32 d.结论:靶向Rab9 GTPase基因的shRNA能特异性抑制Rab9 GTPase表达和麻疹病毒Edmonston株体外复制,有望成为抗麻疹病毒感染治疗的核酸药物.