泡桐属植物ISSR-PCR反应体系的优化

LU Yan-yan,LI Hai-ying,RU Guang-xin,LIN Cai-li,CHEN Zhi-tao,YANG yang

Journal of Henan Agricultural University（2013）

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摘要

为建立和优化泡桐属植物高效、稳定的ISSR-PCR反应体系,本试验采用了5因素4水平的正交试验以及单因素梯度优化相结合的方法,筛选出了泡桐属植物最适的ISSR-PCR反应体系,即20μL体系中含buffer 2.5μL,Taq酶2.0 U,Mg2+3.75 mmol.L-1,0.4 mmol.L-1 dNTPs,引物0.35 mmol.L-1,模板40 ng.扩增程序为:94℃预变性5 min,然后94℃变性30 s,55℃复性45 s,72℃延伸90 s,40个循环,72℃延伸7 min,最后4℃保温.

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关键词

Paulownia,orthogonal design,single factor,ISSR system establishment and optimization

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