日本(虫寻)酚氧化酶的分离纯化及其部分生物化学性质研究

利用离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,从日本(虫寻)(Charybdis japonica)血淋巴中分离纯化出了酚氧化酶,并以L-二羟苯丙氨酸(L-DOPA)作为特异性底物对其生化性质和酶性质进行了研究.结果表明,酚氧化酶和酚氧化酶原的分子质量分别为64.5 ku和69.5 ku.以L-DOPA为底物对酚氧化酶纯品进行研究发现,其最适pH值为6.0、最适温度为40℃.对底物L-DOPA和儿茶酚的米氏常数Km值分别为3.41和7.97 mmol/L.该酶对亚硫酸钠、苯硫脲极为敏感,对硫脲、苯甲酸非常敏感,表明该酶很可能是一种儿茶酚酶型的酶.此外,EDTA,DETC,Zn2+,Mg2+和Cu2+均能显著抑制该酶活性,且10 mmol/L Cu2+能有效地回复该酶被DETC所抑制的酶活性,表明该酶确为一种Cu-金属酶.