肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

目的:建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌干细胞特征的细胞亚群的方法.方法:采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞(cancer stem cell,CSC)分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养,获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球.流式细胞术检测Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CD133的表达,平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力.结果:Huh7细胞成球培养3～7d后即可形成肝癌干细胞样细胞球,获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力,其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加[(99.6％±0.31)％vs(0.12％±0.05)％,P＜0.01],但两种细胞CD90[(0.11％±0.06)％vs(0.09％±0.07)％,P＞0.05]和CD133[(0.17％±0.08)％vs(0.15％±0.05)％,P＞0.05]表达差异无统计学意义.Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞[(188.67±12.5)vs (79±16.7)个,P＜0.01];当接种量为5 ×104个细胞时,与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比,接种Huh7干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短(11vs 30 d),成瘤率更高(100％vs 16.67％);接种5×105数量级的细胞时,实验组成瘤体积[(171.90±10.94) vs(86.39±11.21)mm3,P＜0.01]和瘤体质量[(2.98 ±0.82)vs(0.32 ±0.17)g,P＜0.01]均明显大于对照组.结论:利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞,其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力.