人血管能抑素基因N端片段的表达、纯化及其生物活性测定

以中国人胎盘脐带组织为材料, 提取组织总RNA, 用RT-PCR方法合成人血管能抑素cDNA, 将该cDNA克隆进pSP72载体获得重组质粒pSP72C. 以pSP72C为模板, PCR方法合成编码血管能抑素N端1～89 aa的基因片段, 将其克隆进pET-3c载体获得重组表达质粒pET-CN,转化E. coli BL21(DE3), SDS-PAGE分析显示, 在IPTG诱导下, 人血管能抑素N 端基因片段获得了有效表达, 表达量约占菌体总蛋白质的35.3 %, 主要以包涵体形式存在. 包涵体经过洗涤、裂解、蛋白质复性以及Sephadex G-100凝胶过滤层析等步骤纯化后, 获得了纯度约92.6 % 的人血管能抑素N 端片段, CAM实验证明具有显著抑制鸡胚新生血管生成活性.