HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:观察缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)在缺氧环境下对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和血管内皮生长因子VEGF表达的影响.方法:设计针对HIF-1αRNA亚基模板序列的反义、正义寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotides,SODN),并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型,观察缺氧培养不同时相HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF的表达的影响.RT-PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA水平,免疫组化和免疫印迹方法检测HIF-1α和VEGF蛋白表达情况.结果:与常氧组比较,单纯缺氧组及SODN缺氧组的HIF-1α转录水平未见明显改变,蛋白表达水平却随缺氧时间延长明显升高;而VEGF mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强.然而在ASODN缺氧组,HIF-1α、VEGF mRNA活性以及蛋白的表达水平明显减弱,且HIF-1α蛋白水平与VEGF转录活性有明显的相关性.结论:在缺氧环境下,转染HIF-1α反义寡核苷酸能够抑制HIF-1α活性,从而使VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显下降.