犬内皮与平滑肌细胞的短期静态联合培养

目的:为获得组织工程化自体血管,观察体外静态培养条件下犬内皮细胞与平滑肌细胞联合培养组织学及形态学的特征.方法:实验于2004-07/2005-06在首都医科大学宣武医院外科院级实验室完成.①实验材料:雄性杂种犬,3个月龄,体质量8～12 kg.②实验方法:贴块法及酶解法对犬内皮细胞及平滑肌细胞进行原代分离培养及扩增,将第Ⅱ代平滑肌细胞以1×109 L-1的密度种植于胶原膜上培养13 d,再将第Ⅱ代内皮细胞接种于生长平滑肌细胞的胶原膜上2 d.③实验评估:行苏木精-伊红染色同时扫描电镜和透射电镜观察平滑肌细胞和内皮细胞在胶原载体上联合培养后的形态.结果:苏木精-伊红染色见平滑肌细胞较均匀的分布于支架材料表面及内部;扫描电镜下,平滑肌细胞可以在胶原载体材料上生长,增殖明显并在短期内形成多层细胞.内皮细胞与平滑肌细胞联合培养2 d就可在平滑肌细胞层表面获得连续的单层内皮细胞层.结论:在短期静态培养条件下犬的血管平滑肌细胞和内皮细胞可以在胶原载体材料上形成具有两层细胞结构的组织工程化动脉血管组织片.