人源化抗人肺癌二价和四价VH单域抗体的制备及活性分析

目的 为提高人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH的功能性亲和力,制备其二价和四价的抗体分子.方法 重组PCR分别将SV5-Cys短肽和p53四聚化结构域基因与hu3D3VH基因融合,而获得同源二聚体dihu3D3VH和同源四聚体tehu3D3VH基因.将两种基因克隆至pET-22b(+)表达载体,并分别在E.coli BL21(DE3)中表达.表达产物通过N2+亲和层析柱纯化.用FITC分别标记hu3D3VH、dihu3D3VH和tehu3D3VH三种抗体分子,通过免疫荧光实验分析其抗原反应性和特异性,并利用流式细胞术比较分析其功能性亲和力.结果 两种基因均以单体形式并主要以包涵体的形式表达,纯化并复性后,其蛋白溶液中分别存在约50%的二聚体和70%的四聚体.dihu3D3VH和tehu3D3VH均保留了hu3D3VH的抗原反应性和特异性;且与hu3D3VH相比,其功能性亲和力分别提高了约60%和160%.结论 采用增加结合价的策略,有效地改善了hu3D3VH的功能性亲和力.