3-PBA降解菌BA3的降解特性及基因工程菌构建

从石油污染土壤中分离到1株能以3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)为唯一碳源生长的细菌,命名为BA3.根据其生理生化特征和16S rDNA序列相似性分析,将该菌鉴定为鞘脂菌属(Sphingobium sp.).该菌株在60 h内对100 mg·L-1的3-苯氧基苯甲酸的降解率达到99%.降解3-苯氧基苯甲酸的最适温度为30℃,pH值为7.0,降解速率与初始接种量呈正相关.拟除虫菊酯类杀虫剂水解酶基因pytH为本实验室克隆到的一个新的菊酯水解酶基因,通过PCR从菊酯降解菌株JZ-2总DNA扩增了pytH,将pytH定向克隆到pBBRMCS-5载体上,构建重组质粒pPYTH,在辅助质粒pBK600的帮助下,通过三亲接合将pPYTH转移到3-PBA降解菌株Sphingobium sp.BA3中,获得工程菌Sphingobium sp.BA3-pytH;甲氰菊酯的降解实验表明,菌株JZ-2在48 h内对50 mg·L-1的甲氰菊酯降解率仅为60%左右,工程菌BA3一pytH相同条件下对50 mg·L-1的甲氰菊酯降解率达到95%以上,同时对甲氰菊酯的降解中间产物3-PBA也能较快降解,不会对菊酯的降解产生反馈抑制.工程菌BA3-pytH因其对甲氰菊酯和其降解中间产物3-PBA的快速降解能力,比原始菌株JZ-2在菊酯污染土壤生物修复应用中更具有优势.