结核分枝杆菌Rv3671c蛋白诱导人巨噬细胞死亡及TNF-α和IL-1β水平检测

目的 评价MTB Rv3671 c蛋白对人巨噬细胞(THP-1)的影响及机制.方法 将编码MTB Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-28a质粒,并在大肠埃希菌中进行表达,采用镍亲和层析和离子层析法纯化重组Rv3671c蛋白,Lowry法测定蛋白浓度,并用纯化蛋白刺激分化成熟巨噬细胞,采用Hochest染色法观察细胞的转归(凋亡及坏死)情况,同时取上清液用ELISA法检测TNF-α和IL-1β 的浓度.结果 MTB Rv3671c蛋白在大肠埃希菌中成功表达,层析纯化获得纯度为95.0％的重组Rv3671c蛋白,蛋白浓度可达0.4 mg/ml.Rv3671c蛋白刺激下经Hochest染色可见巨噬细胞核以坏死状多见,上清液中TNF-α和IL-13水平最高分别可达19 000、16 500 pg/ml；而未加蛋白干预组TNF-α和IL-1β水平最高仅为2100、3800 pg/ml,均明显低于干预组.结论 MTB Rv3671c蛋白可诱导人THP-1坏死,而该死亡可能与细胞因子TNF-α和IL-1β高表达有关.