Mise au point d’un test de dosage et caractérisation des anticorps anti-TIF1gamma au cours des dermatomyosites paranéoplasiques

Introduction Le pronostic des dermatomyosites (DM) paraneoplasiques est celui du cancer associe. L’auto-anticorps (aAc) anti-TIF1γ (ou anti-p155) a un interet majeur lors du diagnostic de DM, puisque sa presence multiplie par 27 le risque de cancer associe. Cependant, leur role dans la survenue ou le maintien de la DM n’est pas connu. L’objectif de cette etude etait de caracteriser le profil biologique des aAc anti-TIF1γ et le profil clinique associe, grâce a la mise au point d’un test de dosage par la technique Luminex. Patients et methodes La technique Luminex consiste a mesurer une moyenne d’intensite de fluorescence (MIF) de billes couplees a la proteine recombinante TIF1γ en cytometrie de flux. Apres incubation des billes avec les serums, les anticorps fixes sur les billes sont reveles par streptavidine-PE, dont la fluorescence est proportionnelle a la quantite d’aAc. Les serums de 82 malades atteints de DM, 100 temoins sains et 152 malades porteurs d’autres maladies auto-immunes, provenant des collections biologiques du CHU de Rouen et de la Pitie-Salpetriere, ont ete analyses. La sensibilite et la specificite analytiques du test ont ete evaluees a l’aide d’un anticorps anti-TIF1γ commercial et de tests d’inhibition par la proteine recombinante TIF1γ. Des serums positifs pour l’anticorps anti-TIF1γ ont ete analyses en immunofluorescence indirecte (IFI) sur cellules Hep2 (n = 12) et par immunoprecipitation (n = 4). L’affinite des aAc a ete estimee a l’aide du test Luminex, par elution a concentration croissante de thiocyanate d’ammonium apres fixation des aAc sur les billes. La reactivite de l’anti-TIF1γ sur la peau et le muscle humains a ete evaluee par IFI a partir de dechets operatoires obtenus du service de chirurgie orthopedique et plastique du CHU de Rouen, avec le consentement du patient. Resultats Le test Luminex permet de detecter une concentration d’anticorps tres faible (0,8 ng/mL). Les billes couplees a la proteine TIF1γ ne detectent que les anticorps correspondant. La presence de TIF1γ sous forme libre inhibe la fixation des anticorps sur les billes, validant la specificite de la technique. Le seuil de positivite du test a ete etabli a 4 UA/mL avec une zone critique entre 2 et 4 UA/mL. La sensibilite et la specificite du test sont respectivement de 100 et 97 %. Sur les 82 serums de DM analyses, 15 (18,3 %) etaient positifs (dont 3 enfants) avec un taux allant de 12 a 258 UA/mL. Les aAc anti-TIF1γ etaient d’isotype IgG1 (11/12), rarement associe a des IgG2 (1/12). L’affinite a ete evaluee pour 10 serums d’adultes. Dans 8 cas, l’elution etait effective pour une molarite inferieure a 0,75. Deux serums necessitaient des molarites de 1,4 et 2,5 M, indiquant une plus forte affinite. Quatre des quatre serums testes immunoprecipitaient bien la proteine TIF1γ. L’IFI sur HEp2 retrouvait, pour 11/12 serums, un meme marquage nucleaire, avec un aspect mouchete granuleux a nucleoles negatifs. L’IFI confirmait egalement que TIF1γ est exprime dans le cytoplasme et le noyau des cellules musculaires et epidermiques. Cliniquement, le groupe des 12 adultes positifs pour les anti-TIF1γ etait âge de 64 ans (± 16 ans) ; le sex-ratio etait a 1. Cinq cas sur 12 etaient associes au cancer (poumon a petites cellules, prostate, carcinose peritoneale sans primitif identifie, ovaire). Le taux d’aAc etait en moyenne plus eleve (105 UA/mL vs 50 UA/mL) que le groupe sans cancer. Dans 2 cas, la decouverte du cancer etait concomitante de la DM et les anticorps etaient de faible affinite ; dans 2 autres cas, la neoplasie precedait la DM de plusieurs annees et les anticorps avaient un taux > 120 et etaient de forte affinite. Les 4 malades sur 12 qui avaient une forme amyopathique de DM avaient tous une neoplasie associee. Discussion Les formes associees au cancer sont plus souvent amyopathiques. De plus, les aAc semblent avoir une affinite pour l’antigene plus importante lorsque le cancer est plus ancien. Une equipe japonaise a rapporte le cas d’une patiente atteinte de DM associe a une neoplasie uterine hyper-exprimant TIF1γ. Ces resultats soulevent la question de l’existence d’une reponse anti-TIF1γ anti-tumorale initiale. En effet, la persistance de l’antigene pourrait favoriser une hypermutation des lymphocytes B, expliquant la meilleure affinite des aAc et peut-etre l’absence de reactivite sur le muscle. Conclusion Le test Luminex a permis de detecter les patients positifs pour l’aAc et d’evaluer les caracteristiques biologiques de ces aAc. Nos resultats suggerent un lien direct entre la presence du cancer et le developpement d’une reponse anti-TIF1γ. Cet aAc etant specifique des DM, il est important a present d’etablir si les aAc anti-TIF1γ sont directement pathogenes et donc impliques dans le declenchement de la DM.