线粒体融合蛋白2对内毒素致急性呼吸窘迫综合征肺纤维化的影响

目的 从细胞水平观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)对内毒素(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化形成的影响.方法 LPS以浓度梯度及时间梯度作用于人胚肺成纤维细胞(HELF),检测细胞内胶原蛋白表达情况,建立ARDS细胞模型;以复制缺陷型腺病毒作为载体,将Mfn2蛋白转移到HELF中,通过Western blot检测HELF中Mfn2蛋白水平,并运用MTT观察HELF增殖情况,考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白、Sircol胶原测定试剂盒测定胶原蛋白含量.结果 LPS浓度为0.5、1、5、10μg/mL刺激HELF 24 h,细胞内胶原蛋白水平分别为(70.97±1.03)、(71.31±0.82)、(76.50±1.31)、(76.84±1.44)μg/mg,与对照组(69.08±2.48)μg/mg相比较差异有统计学意义(P值分别为0.028、0.011、0.000、0.000),且在LPS 5μg/mL时作用显著;LPS(5μg/mL)处理HELF 6、12、24、48 h,细胞内胶原蛋白水平分别为(70.67±0.96)、(73.39±0.80)、(76.01±0.59)、(76.91±0.79)μg/mg,与对照组(69.66±0.99)μg/mg比较差异有统计学意义(P值分别为0.031、0.000、0.000、0.000),并且在24 h时作用明显;LPS以浓度及时间依赖性诱导HELF胶原蛋白的表达,建立ARDS细胞模型适宜的条件为5μg/mL LPS刺激HELF 24 h;同时发现LPS组较对照组Mfn2蛋白表达明显下调(P=0.000),转染Adv-Mfn2后,LPS+Adv-Mfn2组较LPS组Mfn2蛋白表达明显上调(P=0.000);与LPS组相比较,LPS+Adv-Mfn2组HELF 12、24、48 h细胞增殖率(0.93±0.06、1.48±0.03、1.76±0.01)明显降低(P<0.05),且胶原蛋白水平(72.12±0.30)、(73.21±0.26)、(73.46±0.25)μg/mg明显下降(P<0.05).结论 过表达Mfn2能减轻内毒素诱导的肺成纤维细胞增殖并减少胶原产生.