基于3D细胞培养系统的肺癌类干细胞的分离和鉴定

目的：本研究建立三维细胞培养方法（3D）以分离和鉴定肺癌类干细胞，并与二维细胞培养方法（2D）比较，初步探讨该方法在评价肺癌体外增殖、凋亡、侵袭和药物反应性方面的应用。方法：将人肺腺癌细胞系A549以1×104个/孔的细胞与RPMI 1640和伊格尔基础培养基（basal medium of eagle，BME）制成细胞悬液，培养7 d，收集细胞采用流式细胞仪进行类干细胞表型检测，以及体外成球、耐药性、体内成瘤等干细胞功能鉴定，并将3D与2D细胞培养的A549细胞进行比较。结果：细胞表型检测证明3D系统培养的A549细胞中CD44和CD326阳性比例升高，CD24阳性比例下降，细胞体外成球率显著升高（28.50%±1.17%vs.8.67%±0.80%，P<0.01）对顺铂耐药性显著提高。加药后48 h为58.17%±2.19% vs.33.27%±5.76%（P<0.01），加药后72 h为41.70%±5.81%vs.27.30%±4.25%（P<0.01），体内成瘤时间显著缩短[（20.75±0.85）d vs.（60.25±1.49）d，P<0.01]。结论：3D培养的肺癌细胞中获得更高比例的类干细胞样细胞，具有体内成瘤快、体外成克隆团率高、耐药性提高的特征。