靶向抑制Id1基因调控Wnt信号通路促进骨肉瘤MG63细胞凋亡

目的:研究分化抑制因子1(inhibitor of differentiation 1,Id1)基因对人骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响,并探讨可能的作用机制.方法:通过重组腺病毒感染的方法将特异性针对M1基因的Id1-siRNA转入骨肉瘤细胞MG63中,分别采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测Id1 mRNA和蛋白的表达水平;Annexin V-FITC单染法及DAPI染色法检测对细胞凋亡的影响,FCM法检测对细胞周期分布的影响.蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和survivin,以及Wnt信号通路关键蛋白β-链蛋白(β-catenin)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体2(receptor tyrosine kinase-like orphan receptor2,ROR2)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)蛋白的表达水平.结果:采用重组腺病毒Ad-Id1-siRNA感染MG63细胞后,Id1 mRNA及蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜ 0.05);Annexin V-FITC单染法和DAPI染色检测结果显示,沉默Id1基因表达后MG63细胞的凋亡率明显提高(P值均＜ 0.05);半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,抗凋亡因子Bcl-2和survivin mRNA及蛋白的表达水平均明显下调(P值均＜0.05);蛋白质印迹法检测结果显示,Wnt信号通路关键蛋白β-catenin以及Wnt通路相关蛋白ROR2和CHOP的表达水平均明显下调(P值均＜0.05).结论:靶向沉默Id1基因表达能促进骨肉瘤细胞的凋亡,其作用可能与抑制Wnt信号通路的活性有关.