抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体体外生物学活性检测方法的优化及验证

目的 优化抗肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单克隆抗体体外生物学活性的检测方法,并进行验证.方法 对TNF-d单克隆抗体体外生物学活性检测方法中的结晶紫染色液浓度、细胞浓度、放线菌素D(ActD)浓度及TNF-α杀伤浓度进行优化,并对该方法的精密度及专属性进行验证.绘制质量控制图,对抗TNF-α单克隆抗体样品进行20次重复检测.结果 结晶紫染色液、细胞浓度、ActD和TNF-α的最适浓度分别为0.2％、1.5×105个/ml,1 ng/ml和0.8μg/ml.同一人员于不同日6次重复测定参考品的半数有效浓度(ED50)均值为(44.18±6.858) ng/ml,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为15.522％;不同日由3位不同人员重复测定参考品的ED50均值为(41.19±3.05) ng/ml,RSD值为7.40％;在TNF-α浓度一定的情况下,随着抗TNF-α单克隆抗体和阳性对照Humira浓度的降低,细胞的存活率随之降低,其他抗体无此现象.抗TNF-α单克隆抗体样品的20次测定结果均成立.结论 成功优化了抗TNF-α单克隆抗体体外生物学活性检测方法的条件,该方法具有良好的精密度及专属性.