亨廷顿蛋白相关蛋白1基因对小鼠成纤维细胞增殖的影响

目的 研究亨廷顿蛋白相关蛋白1(Huntingtin-associated protein 1,Hap1)基因对成纤维细胞增殖的影响.方法 体外分离培养获得Hap1基因敲除(Hap1 /)的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期(流式细胞术)检测验证Hap1敲除后成纤维细胞增殖的改变;将野生型和Hap1-/-成纤维细胞送转录组测序筛选增殖相关基因,实时荧光定量PCR (qPCR)验证相关基因表达水平的改变.对小鼠进行皮肤损伤造模检测Hap1敲减(Hap1+/-)小鼠皮肤损伤修复情况;PCNA免疫组化染色检测损伤修复过程中成纤维细胞的增殖水平.结果 成功培养原代Hap1-/-成纤维细胞;与野生型成纤维细胞相比,Hap1-/-成纤维细胞EdU阳性比例减少,进入S期的细胞比例减少;原代成纤维细胞转录组测序筛选出Cdc25C、E2f7、E2f8和Ccl5四个差异表达的增殖相关基因,qPCR验证发现E2f7在Hap1敲除后表达增多.小鼠皮肤损伤结果显示,Hap1+/-小鼠伤口面积较相同时间点野生型小鼠伤口面积大且愈合速度减慢,成纤维细胞增殖阳性密度低于野生型小鼠.结论 Hap1可能通过抑制细胞周期负性调节因子E2f7的表达对成纤维细胞增殖起正向调节作用,其缺失将抑制成纤维细胞进入S期,从而减少细胞增殖,影响伤口修复.