用酵母双杂交技术研究IGF-1与其结合蛋白3的相互作用

为了探讨胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)分子上的胰岛素样生长因子1(IGF-1)结合位点并找出其关键氨基酸残基组成,首先建立了研究IGF-1与IGFBP-3相互作用的酵母双杂交模型,可以定性和定量地分析两个蛋白质之间的相互作用大小;同时利用基因体外定点突变的方法,对推断出的IGF-1结合位点中的氨基酸突变,经DNA序列分析,构建了5种IGFBP-3突变体.然后在酵母双杂交模型中通过对报告基因活性的定量分析,检测IGF-1与各种IGFBP-3突变体之间相互作用的大小.结果表明,IGFBP-3分子上的Lys222,Gln223突变后,与IGF-1的结合力大大下降,而Arg225,Pro226,Ser227突变后也导致与IGF-1结合力的部分下降.从而初步确定了IGFBP-3分子中第222～227位的氨基酸区域为IGF-1的结合位点,并且IGFBP-3分子上Lys222,Gln 223在与IGF-1结合中起着重要作用.