血清2型鸭疫里默氏杆菌脂多糖单克隆抗体的研制及特性鉴定

[背景]鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)可感染雏鸭、鹅、火鸡等多种禽类,引起急性或慢性传染病.RA血清型众多且各血清型之间缺乏有效的交叉保护.细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)位于革兰氏阴性菌细胞壁的外侧,其组成和结构变化决定了细菌表面抗原决定簇的多样性.[目的]制备血清2型鸭疫里默氏杆菌LPS单克隆抗体并对其特性进行研究.[方法]以血清2型RANJ3株免疫BALB/c小鼠,细胞融合后以RANJ3株LPS作为包被抗原,筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过体内诱生腹水法制备抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单克隆抗体效价,玻片凝集试验和Western blot检测单抗特异性.[结果]获得两株能稳定分泌抗血清2型鸭疫里默氏杆菌LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为8G5和8G10;两株单抗的亚型均为IgM/K链.ELISA结果表明,8G5和8G10腹水效价分别为1∶32 000和1∶16 000.Western blot结果显示,两株单抗仅与血清2型RA菌株发生特异性反应,而与其他血清型RA菌株和禽源致病菌无反应性.[结论]研究获得的单克隆抗体具有良好的反应性和血清型特异性,可用于RA致病机制的基础研究和进一步建立RA血清型快速检测方法.