三氯化钆抑制Kupffer细胞活化减轻小鼠肝脏部分热缺血再灌注损伤

目的 探讨三氯化钆(GdCl3)抑制Kupffer细胞活化减轻小鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IRI组)、三氯化钆组(Gd+ IRI组)、钴原卟啉(CoPP+ IRI)组,每组12只.Sham组与IRI组分别于术前24 h经腹腔注射等体积生理盐水;Gd+ IRI组、CoPP+ IRI组分别于术前24 h经腹腔注射GdCl3(20 mg/kg)、CoPP(5mg/kg).除Sham组仅行开关腹手术外,其他组70％肝脏缺血60 min再灌注6h.比较各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平.酶联免疫吸附试验检测小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)活性.肝组织实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、血红素血氧合酶-1(HO-1)及保护性因子IL-10的表达.免疫组织化学法标记肝胆管上皮细胞中凋亡相关基因Fas、FasL的表达.正态分布的两样本均数比较采用独立样本t检验,多组之间比较采用方差分析.结果 IRI组、Gd+ IRI组及CoPP+ IRI组血清ALT分别为(1 236.7±62.4)、(638.9士50.9)、(740.3±53.1)U/L,AST分别为(1107.8±68.3)、(568.5±42.7)、(679.1±49.9)U/L,Gd+ IRI组及CoPP+ IRI组明显低于IRI组,差异均有统计学意义(t=6.721、4.732、5.984、2.691,P＜0.05).与IRI组比较,Gd+IRI组和CoPP+ IRI组的SOD、GSH-Px活性明显提高(=7.301、1.937,P＜0.05),且MDA含量显著减少(t=9.519、8.635,P＜0.01),Gd+ IRI组及CoPP+IRI组TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达明显降低(=6.721、2.316,P＜0.05),而IL-10、HO-1的mRNA相对表达明显升高,差异有统计学意义(t=2.973、7.921,P＜0.01).肝血流再灌注6h后,Gd+ IRI组及CoPP +IRI组小叶间胆管上皮细胞Fas阳性表达率分别为22.4％、29.7％,低于IRI组(38.9％)差异有统计学意义(x2 =6.561、2.547,P＜0.05);Gd+ IRI组及CoPP +IRI组FasL阳性表达率为21.2％、25.1％,明显低于IRI组(36.5％)(x2 =5.982、3.188,P＜0.05).结论 三氯化钆抑制Kupffer细胞活化,通过抗氧化、抗炎和抗细胞凋亡的作用减轻小鼠HIRI,其机制可能与促进HO-1的表达及下调Fas/FasL的表达有关.