受体相互作用蛋白3对自身免疫性肝炎巨噬细胞的活化及白细胞介素6的影响

目的 探索自身免疫性肝炎(AIH)肝组织活化的巨噬细胞受体相互作用蛋白(RIP)3的表达水平,及其对细胞因子的调控作用.方法 应用免疫荧光双染法观察AIH与肝囊肿旁肝组织巨噬细胞浸润程度及RIP3的表达水平.通过蛋白质印迹法检测RAW264.7巨噬细胞经不同浓度(0、1、3、6、10μg/mL)脂多糖、RIP3通路抑制剂Necrostatin-1和硫唑嘌呤有效分子6-硫基嘌呤不同组合处理24 h后RIP1(RIP3上游信号分子)、RIP3和混合谱系激酶结构区域样蛋白(MLKL;RIP3下游底物)的表达水平.实时荧光定量PCR检测各处理组中巨噬细胞相关细胞因子mRNA表达水平.统计分析采用t检验和秩和检验,相关性采用秩相关分析.结果 与肝囊肿旁肝组织相比,AIH肝组织CD68阳性巨噬细胞浸润显著增多(4.75±0.96比28.86±6.23),差异有统计学意义(t=7.80,P＜0.05),且其RIP3表达水平显著增高[15(11,22)比0(0,1)],差异有统计学意义(Z=-2.66,P＜0.05).体外实验发现,与对照组相比,1、3、6、10 μg/mL脂多糖组RIP1、RIP3和MLKL的蛋白质表达水平均增高,差异均有统计学意义(t=4.00、4.90、6.40、10.30,3.80、9.30、9.80、9.00,4.90、9.90、9.30、7.70,P均＜0.05),且呈剂量依赖性(r=0.91、0.86、0.79,P均＜0.05).与脂多糖组相比,Necrostatin-1+脂多糖组RIP1、RIP3、MLKL蛋白质的表达水平均下调(分别为0.73±0.11比0.47±0.13,0.60±0.07比0.37±0.05,0.65±0.22比0.38±0.04),差异均有统计学意义(t=2.60、4.50、2.10,P均＜0.05);IL-1β、IL-6和IL-10 mRNA表达水平也下调(分别为810.3±200.8比463.7±118.1,1 504.4±482.7比290.4±106.9,1 358.6±559.2比677.8±297.6),差异均有统计学意义(t=5.40、12.52、5.70,P均＜0.05),而IL-4和TGF-βmRNA表达水平均上调(分别为0.3±0.2比0.6±0.3,0.4±0.1比0.9±0.4),差异均有统计学意义(t=4.60、6.10,P均＜0.05).与脂多糖组相比,6-硫基嘌呤+脂多糖组IL-1β、IL-6和IL-10 mRNA表达水平均下调(810.3±200.8比283.4±65.5,1 504.4±482.7比354.4±73.8,1 358.6±559.2比625.6±336.3),差异均有统计学意义(t=4.30、10.60、3.50,P均＜0.05),而IL-4和TGF-βmRNA表达水平均上调(0.3±0.2比0.6±0.1,0.4±0.1比0.5±0.1),差异均有统计学意义(t=5.20、12.50,P均＜0.05).结论 6-硫基嘌呤对RIP3信号通路相关蛋白质及相关细胞因子的调控作用与Necrostatin-1相似.AIH患者肝组织活化的巨噬细胞RIP3信号蛋白质表达水平增高与IL-6的调控紧密相关,巨噬细胞RIP3介导的炎性信号通路可能参与AIH的发生、发展,并成为潜在治疗靶点.