mTOR自噬信号通路和凋亡在DEHP致SD尿道下裂胎鼠中的改变

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[Di(2-Ethylhexyl) Phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的机制.方法 20只成年孕SD鼠[10～12周龄,体重(240±20 g)]按照数字随机化法分为:正常对照组(n=10)和DEHP暴露组(750 mg·kg-1·d-1)(n=10),于妊娠期(gestationday,GD)第8.5～18.5日每日灌胃,于GD 19.5时剖宫取出胎鼠,以有无睾丸分辨雌雄,并在解剖显微镜下观察有无尿道下裂的发生.测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)和肛门生殖指数(anogenital index,AGI),扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态改变,透射电镜观察阴茎组织内自噬的改变,western blot检测生殖结节(GTs)中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1、Akt、mTOR、p-Akt、p-mTOR和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bax、Bcl2的表达水平,TUNEL法检测雄鼠GTs中细胞凋亡.结果 DEHP暴露后出现尿道下裂,发生率为27.58％,尿道下裂组中AGD、AGI均明显降低(P＜0.05);尿道下裂雄鼠的GTs出现腹侧尿道缝融合障碍及尿道开口异位.尿道下裂组GTs中LC3和Beclin1的表达、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P＜0.05),p62、p-Aktser473、p-mTORser2448表达明显减少(P＜0.05),Bcl2表达减少(P＜0.05),cleaved-caspase3和Bax蛋白表达水平则明显增高(P＜0.05),细胞凋亡显著增加(P＜0.05).结论 DEHP作为一个外源性干扰物进入机体后,致使胎鼠的GTs中PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制,自噬水平增加,同时促凋亡与抗凋亡系统失衡,进一步促进自噬的发生,最终使得凋亡异常增加,导致尿道下裂的发生.