miR-7-5p靶向调控POLE4对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y体外增殖和侵袭的影响研究

目的 探讨微小RNA-7-5p(microRNA-7-5p,miR-7-5p)对POLE4蛋白[Polymerase(DNA-directed),epsilon 4,POLE4]的调控作用及其对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞SH-SY5Y体外增殖 、侵袭的影响.方法 利用生物信息学软件预测miR-7-5p的靶基因为POLE4;运用荧光素酶实验验证miR-7-5P对POLE4的直接靶向作用.将SH-SY5Y细胞分为miR-7-5p过表达实验组(miR-7-5p组)、阴性对照组和空白对照组并进行细胞转染,运用RT-PCR、Western Blot实验检测转染后的SH-SY5Y细胞中POLE4 mRNA和蛋白的表达量,然后通过克隆形成实验和Transwell小室法检测转染后的SH-SY5Y细胞的体外增殖活力和侵袭能力的变化.结果 运用TargetScan、PicTar和miRanda软件预测miR-7-5p的靶基因为PLOE4.RT-PCR和Western Blot实验显示,miR-7-5p组中POLE4 mRNA和POLE4蛋白的相对表达量分别为0.53±0.04和0.26±0.02,与阴性对照组和空白对照组相比,表达水平均下调明显,且差异有统计学意义(P均<0.05).说明miR-7-5p能够显著抑制POLE4 mRNA和POLE4蛋白的表达.过表达miR-7-5p后,miR-7-5p组集落形成数为(87±3)个,较阴性对照组(138±3)个和空白对照组(156±4)个明显减少,且差异有统计学意义(P<0.05).说明miR-7-5p可以下调神经母细胞瘤细胞的增殖活力.Transwell小室检测实验发现,miR-7-5p组穿透基质胶的细胞数为(82±5)个,较空白对照组(349±9)个和阴性对照组(232±5)个明显减少,且差异有统计学意义(P<0.05).说明miR-7-5p对SH-SY5Y细胞的侵袭能力有明显抑制作用.结论 miR-7-5p通过靶向抑制POLE4的表达进一步抑制NB细胞的增殖和侵袭能力,可能作为抑制NB细胞增殖和转移的潜在靶点.