GPR35活化在氧糖剥夺-复氧复糖大鼠皮质星形胶质细胞凋亡中的作用

目的 评价G蛋白偶联受体35 (GPR35)活化在氧糖剥夺-复氧复糖大鼠皮质星形胶质细胞凋亡中的作用.方法 体外培养大鼠原代皮质星形胶质细胞,接种于6孔板或96孔板,采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)、GPR35抑制剂+氧糖剥夺-复糖复氧组(GO组)和GPR35抑制剂组(G组).采用无糖培养基无氧(95％ N2和5％ CO2)孵育6h,正常培养24h的方法制备氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型,GO组和G组在氧糖剥夺前1h向培养基内加入3μmol/L GPR35抑制剂CLD2745687.各组处理结束24h后,采用Annexin V-FITC/GFAP/DAPI免疫荧光染色法确定细胞凋亡率,ELISA法检测细胞质内环磷酸腺苷(cAMP)含量,Flu03/AM免疫荧光法测定胞浆钙离子浓度,采用RT-PCR法检测超极化激活的环核苷酸门控通道2(HCN2) mRNA表达,Western blot法检测Bax和Bcl-2的表达.结果 与C组比较,O组和GO组皮质星形胶质细胞凋亡率升高,胞浆钙离子浓度升高,HCN2 mRNA、cAMP和Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P＜0.05);与O组比较,GO组皮质星形胶质细胞凋亡率降低,胞浆钙离子浓度降低,HCN2 mR-NA、cAMP和Bax表达下调,Bcl-2表达上调(P＜0.05);C组与G组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GPR35活化参与了氧糖剥夺-复糖复氧后大鼠星形胶质细胞凋亡的过程.