稳定表达携带SFB标签的猪圆环病毒2型Cap蛋白细胞株的构建及其凋亡活性检测
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine（2017）
摘要
为建立稳定表达携带SFB标签的猪圆环病毒2型(PCV2) Cap蛋白的细胞株并研究其诱导凋亡活性,本研究利用Gateway系统构建真核表达载体pDEST-SFB-ORF2,转染PK15细胞,嘌呤霉素抗性筛选,westernblot和免疫共沉淀试验鉴定,获得2株稳定表达携带SFB标签的Cap蛋白的PK15细胞株.间接免疫荧光检测发现重组Cap蛋白在部分细胞内呈点状荧光分布,可能形成病毒性颗粒;流式细胞仪检测表明Cap蛋白的表达可诱导PK15细胞凋亡.本研究成功表达携带SFB标签的PCV2 Cap蛋白,并验证了其诱导凋亡活性,同时为下一步通过串联亲合纯化/质谱方法鉴定Cap蛋白的互作蛋白研究奠定基础.
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