番茄环纹斑点病毒(TZSV)实时荧光定量PCR检测方法的建立

本研究根据番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus, TZSV)保守N基因(GenBank登录号: 13YV639)设计一对特异性引物,通过优化反应条件和反应体系,构建了TZSV的SYBR Green RT-qPCR检测方法.该方法稳定可靠,组内和组间的变异系数都小于2%;标准曲线的斜率和相关系数分别为-3.39和0.996,扩增效率为97.44%;最低能检测到1.07×104 copies/μL的阳性质粒,灵敏度为常规PCR的1 000倍.同时利用构建的RT-qPCR方法检测TSWV、TNSaV、PCSV和TZSV四种病毒,只有TZSV有特异扩增曲线,表明该方法特异性良好.本研究构建的RT-qPCR方法能够为TZSV的早期预警与动态监测提供可靠的技术支撑.