曼氏无针乌贼精子鞭毛蛋白1(Spef1)基因克隆以及组织表达特异性

为研究精子鞭毛蛋白1(Spef1)在精子鞭毛结构的形成与组装中的生物学意义及功能,本研究采用RACE技术和荧光定量PCR技术对曼氏无针乌贼Spef1(简称SjSpef1)基因cDNA全长进行克隆和组织表达特异性分析.结果显示,SjSpef1 cDNA全长序列共1135 bp,5′和3′非编码区分别为178 bp和165 bp,预测的开放阅读框(ORF)全长792 bp.编码的蛋白理论分子量为30.5677 ku,等电点7.03,是一种亲水性蛋白.不存在跨膜区以及信号肽序列,是在细胞内发挥作用的蛋白.二级结构分析发现该蛋白含有丰富的螺旋结构(49％).氨基酸同源建模显示其蛋白的CH2结构域主要由4个螺旋结构组成,并由多个loop结构串联而成.同源氨基酸序列比对发现,它与加州双斑蛸的相似性最高且仅为59.49％,表明Spef1在进化中并不保守.基于Spef1氨基酸序列构建的系统进化分析表明,曼氏无针乌贼和加州双斑蛸进化关系最近.组织特异性分析表明Spef1在曼氏无针乌贼的精巢中有显著表达.Spef1基因的成功克隆以及组织表达特异性分析对于深入研究其细胞定位以及生物学功能具有重要意义.