Prx-1基因沉默对TGF-β 1 诱导肺成纤维细胞增殖、ROS水平、p-AKT蛋白表达的影响

目的：观察硫氧还原蛋白过氧化物酶1（ Prx-1）基因沉默对转化生长因子β1（ TGF-β1）诱导肺成纤维细胞增殖、活性氧簇（ ROS）水平及磷酸化AKT（ p-AKT）蛋白表达的影响。方法体外培养肺成纤维细胞MRC-5，并分为对照组、TGF-β1组、阴性转染组和实验组。阴性转染组和实验组分别通过脂质体Lipofectamine2000转染阴性对照siRNA及设计好的3个Prx-1 siRNA（Prx-1 siRNA-209、Prx-1 siRNA-289、Prx-1 siRNA-453），培养48 h，real-time PCR法检测Prx-1 mRNA，选取转染Prx-1 siRNA-453的细胞用于后续实验。除对照组外，其余三组给予TGF-β1（5μg／L）刺激。 TGF-β1刺激24 h后，MTT实验观察细胞增殖情况，2，7-二氯荧光素二乙酸（ DCFH-DA）实验检测ROS水平；TGF-β1刺激45min后，Western blotting法检测p-AKT蛋白。结果对照组、TGF-β1组、阴性转染组、实验组OD值分别为0．56±0．07、0．81±0．10、0．88±0．18、1．16±0．18，ROS水平分别为2922±291、4348±484、4660±375、5415±436；实验组细胞增殖情况及ROS水平与其余三组相比，P均＜0．01；TGF-β1组、阴性转染组与对照组相比，P均＜0．01。对照组、TGF-β1组、阴性转染组、实验组细胞中p-AKT蛋白相对表达量分别为0．45±0．05、0．60±0．07、0．57±0．07、0．77±0．09；实验组与其余三组相比，P均＜0．01；TGF-β1组与对照组相比，P＜0．01。结论Prx-1基因沉默可增强TGF-β1对肺成纤维细胞的增殖诱导作用，上调细胞内ROS水平和p-AKT蛋白表达。