ATXN1基因内CAG重复序列拷贝数增加对神经母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨ATXN1基因内CAG重复序列拷贝数增加对神经母细胞瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法 首先构建正常ATXN1基因(CAG重复序列拷贝数为29)和突变ATXN1基因(CAG重复序列拷贝数为61),将其插入pLVX-Puro-3xflag-C载体中构建表达载体,表达载体再与pMD2.G及psPAX2共转染人胚肾细胞(293T细胞)产生慢病毒表达载体,分别感染293T细胞,筛选稳定表达的细胞株.通过CCK8实验检测稳定表达细胞株的增殖能力,通过流式细胞仪检测稳定表达细胞株的凋亡率.结果 表达突变ATXN1基因的细胞在培养3～5d时细胞的OD450值均低于表达正常ATXN1基因的细胞(P＜0.01)和只转染pLVX-Puro-3xflag-C载体的阴性对照细胞(P＜0.01);5 d后表达突变ATXN1基因、正常ATXN1基因、阴性对照细胞凋亡率分别为12.56％、9.06％、8.17％,表达突变ATXN1基因的细胞凋亡率高于表达正常ATXN1基因细胞和阴性对照细胞的凋亡率(P均＜0.01).结论 ATXN1基因内CAG重复序列拷贝数增加可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡.