低氧和缺氧诱导因子-1α对人白血病细胞株K562细胞血管相关生成因子的影响

目的 观察低氧和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对K562细胞分泌血管相关生成因子的影响.方法 选用携带和干扰HIF-1α基因的慢病毒转染K562细胞,以转染携带和干扰HIF-1α基因的K562细胞分别作为过表达组、干扰组,同时以空载病毒转染K562细胞作为对照组,3组在低氧状态下培养72 h后收集细胞.通过荧光显微镜观察转染效率,采用RT-PCR法检测HIF-1α和血管相关生成因子mRNA表达水平;ELISA法检测培养上清液中血管相关生成因子蛋白水平.结果 慢病毒转染K562细胞最佳感染复数(MOI)为10,转染效率约50％,经过嘌呤霉筛选后转染阳性细胞达90％以上.干扰组人血管生成素(ANG)-Ⅱ和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达均低于过表达组,而转化生长因子(TGF)-β mRNA表达高于对照组和过表达组,过表达组ANG-ⅡmRNA表达高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).培养上清液中TGF-α未检测到,过表达组ANG-Ⅱ水平低于对照组(P＜0.05);过表达组VEGF和TNF-α水平高于对照组,干扰组TGF-β和VEGF水平低于对照组(P＜0.05).干扰组TGF-β、VEGF和TNF-α水平低于过表达组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧和HIF-1α可影响慢性白血病K562细胞血管生成相关因子的表达和自分泌,但在mRNA表达和蛋白分泌水平上存在差异.