EL-7013促进Sirt1调控TGF-β1/Smad3通路抑制肺纤维化

目的:对比EL-7013和吡非尼酮(pirfenidone,PFD)的抗纤维化作用及可能机制.方法:向C57BL/6小鼠气管内滴注3 mg/kg博来霉素(bleomycin,BLM)构建肺纤维化动物模型,重组人TGF-β1(10 ng/mL)诱导人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HLF-1)建立肺纤维化细胞模型,分别用EL-7013和PFD干预处理,机制探讨实验用EX-527抑制Sirt1表达及活性.HE、Masson染色评估肺组织病理变化,Western blot检测肺组织中COL1A1、COL3A1、α-SMA等纤维化指标和TGF-β1、Phospho-Smad1/Smad1、Phospho-Smad3/Smad3等通路指标表达,碱水法检测肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量.CCK-8检测细胞增殖活性,免疫荧光染色、Western blot、RT-qPCR检测细胞模型中纤维化及TGF-β1/Smad通路相关指标的蛋白和mRNA表达水平.结果:EL-7013明显减轻BLM诱导的肺组织结构破坏、胶原沉积,减轻TGF-β1及Phospho-Smad3蛋白表达(tBLM-300 mg/kgEL-7013=11.149,P=0.008;tBLM-300 mg/kgEL-7013=16.171,P=0.004),同时明显减轻TGF-β1诱导的细胞增殖(t=6.357,P=-0.024),减少COL1A1、COL3A1、α-SMA、TGF-β1、Phospho-Smad3蛋白累积(t=66.136,P=0.000;t=13.726,P=0.005;t=10.230,P=0.009;t=9.263,P=0.011;t=14.809,P=-0.005).EL-7013可改善TGF-β1刺激导致的Sirt1表达及活性下降,特异性抑制Sirt1削弱了EL-7013的抗纤维化作用及对Phospho-Smad3的抑制作用(t=-6.009,P=0.027).结论:EL-7013通过促进Sirt1从而调控TGF-β1/Smad3信号通路来抑制肺纤维化,为肺纤维的机制、新药研究提供新思路.