体外诱导耐药阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药相关基因筛选

目的 筛选阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药相关基因,为研究该菌氟康唑耐药机制及开发新型抗真菌剂提供理论依据.方法 将临床分离的氟康唑敏感阿萨希毛孢子菌通过不断倍增氟康唑药物浓度的方法进行体外诱导培养,直至药物浓度≥128 μg/mL,再进行无药培养30代,测定其MIC值.分别提取敏感菌株和诱导耐药菌株的总RNA,构建RNA文库,转录组测序后进行生物信息学分析,寻找差异表达基因.相同方法诱导另外2株敏感菌株为耐药菌株,并对3对敏感与耐药菌株的基因组进行测序,比较ERG11基因序列.结果 成功获得稳定的诱导耐药菌株,转录组发现耐药菌株中与药物转运相关基因、麦角固醇合成相关基因、抗氧化基因等上调表达,其中氟康唑靶酶编码基因ERG11基因表达上调了3.7倍.而基因组测序证实3株耐药菌株中ERG11基因的碱基序列未发生突变.结论 阿萨希毛孢子菌耐药分子机制复杂,麦角固醇合成途径中的基因,特别是ERG 11基因上调表达是其主要机制之一,同时还与外排转运基因、抗氧化基因等有关.