高滴度慢病毒制备及其感染人原代T细胞的条件优化

目的 为提高T细胞的感染率, 探究高滴度慢病毒的制备、保存及感染T细胞的较佳条件.方法本研究使用二代和三代慢病毒包装系统搭配二代和三代慢病毒载体、相同载体不同启动子制备慢病毒浓缩后, 用不同保存条件的慢病毒感染Jurkat细胞和不同活化程度的T细胞, 然后用流式细胞仪检测, 进一步计算出病毒滴度和感染率.结果 三代慢病毒包装系统搭配三代慢病毒载体pLVX-EGFP包装慢病毒滴度较高;EF-1a启动子的载体优于CMV启动子的载体;病毒在4℃存储1d和在-80℃冻融1次滴度下降低于10％, 在4℃存储2d以上和在-80℃冻融两次以上滴度下降超过35％;T细胞活化后才能被慢病毒感染;T细胞活化后较佳感染时相点为活化后24h.结论 EF-1a启动子的载体优于CMV启动子的载体;病毒不要反复冻融;T细胞活化后24h转导慢病毒转到效率较高.