长链非编码RNA RP11-363G15.2通过抑制锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞迁移和增殖的影响

目的:探讨长链非编码RNA-RP11-363G15.2在肾癌中的表达及对肾癌细胞PHF8基因表达的抑制作用。方法:实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12对肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)及人近端肾小管细胞HK-2中RP11-363G15.2的表达。选取表达水平最低的肾癌细胞，分别转染RP11-363G15.2质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中RP11-363G15.2和锌指蛋白8(PHF8) mRNA的表达。Western blot检测两组细胞中PHF8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶6(CDK6)、波形蛋白(Vimentin)和神经-钙粘素(N-cadherin)蛋白的表达。Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测两组细胞的迁移能力和增殖能力。结果:qRT-PCR结果提示，肾癌组织中RP11-363G15.2的表达明显低于癌旁组织( P<0.01)，肾癌细胞株中RP11-363G15.2的表达均明显低于人近端肾小管细胞( P<0.01)，OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2的表达最低( P<0.01)。与对照组相比，实验组OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2表达明显增加[(1.06±0.19)vs.(11.09±1.48)，t＝6.75， P<0.01]，PHF8 mRNA表达明显降低[(1.01±0.09)vs.(0.31±0.05)，t＝6.66， P<0.01]。Western blot结果提示PHF8蛋白表达减少，CDK6、Cyclin D1、Vimentin和N-cadherin蛋白表达减少。与对照组相比，转染RP11-363G15.2后的OS-RC-2细胞迁移能力降低( P<0.01)，从第3天开始细胞增殖能力明显降低( P<0.01)。 结论:RP11-363G15.2在肾癌中低表达，RP11-363G15.2可通过下调肾癌细胞OS-RC-2中PHF8基因的表达，抑制细胞的迁移能力和增殖能力，可能为肾癌的治疗提供了一个新的分子靶点。