干扰Twist基因对胰腺癌PANC1细胞糖酵解的影响及机制研究

目的 观察干扰Twist基因表达对胰腺癌PANC1细胞糖酵解的影响,探讨其可能机制.方法 设计并合成靶向Twist的siRNA (siRNA-Twist),采用脂质体法转染胰腺癌PANC1细胞,以非特异性siRNA (siRNA-NC)作为阴性对照,以未转染细胞作为空白对照.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞TwistmRNA和蛋白表达以及蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力;检测糖酵解限速酶(丙酮酸激酶、己糖激酶)活性及培养上清中乳酸含量.结果 对照组、siRNA-NC组和siRNA-Twist组Twist mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.01±0.08、0.36±0.02,蛋白表达量分别为0.41 ±0.05、0.42 ±0.04、0.12 ±0.06,siRNA-Twist组mRNA和蛋白表达量均显著低于对照组和siRNA-NC组,差异有统计学意义(P值均＜0.05);细胞存活率分别为(100.02±9.36)％、(100.01±10.25)％、(59.32±7.26)％,siRNA-Twist组显著低于对照组和siRNA-NC组,差异有统计学意义(P值均＜0.05);丙酮酸激酶活性分别为(0.73±0.05)、(0.72 ±0.08)、(0.43±0.05) U/mg,己糖激酶活性为(4.98±0.48)、(4.96±0.52)、(2.54±0.21) U/mg,乳酸含量分别为(20.36±2.61)、(20.64 ±3.05)、(9.48±1.09) mmol/L;p-Akt/Akt比值分别为0.65±0.04、0.63±0.07、0.25±0.04,siRNA-Twist组均较对照组和siRNA-NC组显著降低,差异有统计学意义(P值均＜0.05).结论 干扰Twist基因表达能够抑制胰腺癌细胞增殖和糖酵解途径,其作用机制可能与Akt信号通路有关.