可作为细胞治疗制品的CD8调节性T细胞的体外诱导扩增方法

目的 建立1种可用于细胞治疗制品的CD8调性T细胞(CD8+ Reularory T cell,Treg)的体外诱导扩增方法,并检测所获Treg细胞性质及功能的稳定性.方法 通过免疫磁珠从人外周血PBMC中分选出CD8+T细胞,在抗人-CD3/CD28磁珠与外源性IL-2激活下,联合使用不同组合的诱导因子:转化生长因子1(TGF-β1)、雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)和全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA),多克隆诱导扩增出CD8+Treg细胞,比较不同诱导组CD8+Treg细胞扩增能力、表型、细胞内因子分泌、抑制功能等情况,筛选出最合适的诱导组细胞,进行体外多轮重刺激扩增并检测其功能及性质的稳定性.结果 对不同组CD8+Treg细胞扩增数量、表型、细胞内因子分泌情况分析得出:TGF-β1和雷帕霉素联合诱导组细胞高表达Foxp3和CD103,扩增能力强,对同种异基因CD4效应T细胞抑制功能可达90％以上、炎性因子IL-2和IFN-γ分泌细胞比例低、在炎性条件下不分泌IL17A和分泌很低量的IFN-γ.体外进行四轮重刺激,扩增倍数最低可达10000倍,且扩增所获Treg细胞活性高,Foxp3表达稳定,各轮抑制功能无显著差别.对Treg抑制作用机制研究发现,Treg通过竞争性消耗内源性IL-2起到部分抑制功能.结论 CD8+Treg细胞体外扩增诱导方法的建立将填补了目前CD8+Treg培养方法上的空白.体外大量扩增的CD8+Treg细胞具有治疗自身免疫病、GVHD等疾病的应用潜力,可作为1种细胞治疗制品运用于临床.同时,通过利用原本在输血中废弃的PBMC,诱导出功能稳定的CD8+Treg细胞,在一定程度上提高了血液的利用效率和促进了成份输血的进程.