PGK1和ENO1介导的有氧糖酵解在脑胶质瘤血管生成中的作用

目的 研究磷酸甘油酸激酶1 (phosphoglycerate kinase 1,PGK1)和α-烯醇化酶(α-Enolase,ENO1)在脑胶质瘤微血管内皮细胞(Glioma microvascular endothelial cells,GECs)的表达,以及介导的有氧糖酵解在脑胶质瘤血管生成中的作用.方法 培养正常人脑为血管内皮细胞(normal microvascular endothelial cells,NECs)和GECs,应用Real-time PCR和Western Blot方法检测PGK1和ENO1的表达水平;设计并构建PGK1和ENO1表达沉默的质粒以及相应的对照质粒,分别转染hCMEC/D3细胞,筛选出稳定表达细胞株后建立PGK1和ENO1表达沉默的GECs;应用葡萄糖检测试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取量,无血清培养法检测乳酸产量,Seahorse XF24细胞能量代谢分析仪检测细胞的细胞外酸化率;应用CCK8实验检测细胞增殖能力变化,Transwell实验检测细胞迁移变化,Marigel基质胶实验检测血管形成能力的变化.结果 与NECs相比,PGK1和ENO1mRNA和蛋白表达水平在GECs中显著增高;PGK1和ENO1表达沉默均显著抑制了GECs的葡萄糖摄取量、乳酸产量和细胞外酸化率,显著降低了GECs的增殖、迁移和血管形成能力.结论 PGK1和ENO1介导的有氧糖酵解促进脑胶质瘤微血管内皮细胞增殖、迁移和血管生成.