人型支原体毒力相关蛋白D的原核表达与纯化

目的 原核表达并纯化人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)毒力相关蛋白D(Virulence-associated protein,VapD). 方法 从GenBank查找Mh VapD基因序列,设计引物并进行优化,合成VapD片段并以此为模板,PCR扩增VapD,然后用EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切并连接表达载体pET28a,构建原核重组质粒pET28a-VapD,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,重组产物经镍柱亲和层析纯化. 结果 合成的VapD基因全长为303 bp,连接原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-VapD.重组质粒转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达分子质量标准为15 ku的重组Mh VapD蛋白,与理论分子质量大小相符合.VapD蛋白具有可溶性,纯化后的目的蛋白电泳检测为单一条带. 结论 成功构建原核重组载体pET28a-VapD并纯化获得VapD蛋白,为进一步研究VapD蛋白的致病机制奠定了基础.