通用H5N1亚型禽流感病毒样颗粒疫苗的制备

目的 高致病性H5N1亚型流感病毒可感染人,并不断衍生出多个新的基因谱系,存在着大规模流行的可能性.我国现有的商品化疫苗无法对不同谱系的H5N1流感病毒感染提供有效的保护.病毒样颗粒(Virus-like particles, VLPs)疫苗具有良好的免疫原性和安全性,成为近年研究的热点.本研究旨在建立H5亚型禽流感病毒通用型病毒样颗粒疫苗的制备方法. 方法 将优化的H5N1 A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e(5个M2e)/HL5M2e(5M2e替代HA的头部嵌入HLHA)、NP基因和M1基因分别插入pFastBacDual载体,得到相应的重组供体.然后将重组供体转化至含Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,获得含有目的基因的重组杆粒. 结果 酶切和PCR鉴定表明成功构建了含目的基因的重组杆粒Bacmid-(HLHA/5M2e/HL5M2e、NP、M1).将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,IFA试验和Western blot试验皆证实,优化的HLHA (HA stem)/5M2e/ HL5M2e、NP基因和M1基因编码的蛋白均获得表达.透射电子显微镜观察VLPs转染Sf9细胞上清的浓缩液中,有球形结构和100 nm左右典型VLPs存在. 结论 在Sf9昆虫杆状病毒表达系统中成功表达H5N1 A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade 2.3.2.1)亚型禽流感病毒的HLHA(HA stem)/5M2e/HL5M2e、NP和M1蛋白,并组装成3种VLPs,为进一步研究流感病毒的VLPs疫苗奠定了基础.