多巴胺能神经营养因子真核表达、纯化及多克隆抗体制备

目的：获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子（ CDNF ）蛋白并制备 CDNF 多克隆抗体。方法：选用VR1012作为真核表达载体，在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白，镍柱亲和层析进行纯化，SDS-PAGE检测纯化情况，Western blot鉴定蛋白的正确性，MTT检测CDNF蛋白对PC12细胞的保护活性。免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。结果：构建的pVR1012-CDNF-his在HEK 293T细胞中高效分泌表达，镍柱亲和层析获得纯度90％以上的CDNF蛋白， MTT结果显示纯化获得的蛋白具有对PC12细胞的保护作用。免疫动物后，成功制备出CDNF 多克隆抗体。结论：通过HEK293 T细胞中表达-镍柱亲和层析获得具有纯度较高且具有生物活性的CDNF蛋白，并成功制备多克隆抗体以方便后续对于CDNF应用及相关机制的研究。