黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍对肝癌细胞自噬作用的影响

目的:观察黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍对人肝癌细胞自噬作用的影响,探讨其抗肝癌的作用机制.方法:体外培养肝癌HepG2及Huh7细胞,设对照组、复方组、组方组,分别给予相应药物处理24h后,溶酶体探针染色法观察细胞内溶酶体形成情况;免疫荧光法观察细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3B)蛋白分布及表达;RTqPCR法检测酵母ATG6同源物(Beclin-1)、LC3B mRNA表达,蛋白印迹法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B的表达.结果:复方组和组方组溶酶体荧光数量明显多于对照组,组方组更明显,两种细胞中对Huh7细胞作用更明显;免疫组化中复方组、组方组LC3B的表达优于对照组,复方组更甚,两种细胞差异不大.HepG2细胞中,复方组和组方组Beclin-1、LC3B mRNA显著增加(P＜0.05);Huh7细胞中,两用药组LC3B mRNA也有增加(P＜0.05).HepG2细胞中,复方组和组方组Beclin-1蛋白表达明显上调(P＜0.05),复方组更明显(P＜0.05),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值升高(P＜0.05);Huh7细胞中组方组LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值升高(P＜0.05).结论:黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍均可诱导肝癌HepG2细胞和Huh7细胞自噬水平增加.