FAK突变体的亚细胞定位及生物学特性

目的：探讨外显子33缺失型黏着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）突变体（FAK-Del33）的亚细胞定位及生物学特性。方法采用基础实验研究设计。将野生型FAK以及突变型FAK-Del33分别构建到pEGFP表达载体,并转染乳腺癌细胞株,以研究分析其细胞表达和定位情况。另构建过表达FAK或FAK-Del33的MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株，研究评价其细胞表达和体外克隆形成能力。结果构建FAK-GFP融合蛋白表达载体转染MDA-MB-468后的细胞定位显示，野生型FAK在胞浆中弥散分布，而FA K突变体蛋白在胞浆中呈点状不均匀分布，并聚集成簇。经限制性内切酶酶切分析与测序分析，成功构建出过表达FAK的慢病毒载体,以293T细胞包装的重组慢病毒能够高效感染乳腺癌细胞；经抗生素puromycin筛选和荧光定量PCR鉴定，成功筛选到稳定表达FAK的细胞株。在软琼脂克隆形成实验中，FAK野生型的克隆形成数为（335±48）/1000个，FAK突变体为（735±91）/1000个，后者对MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株的增殖能力高于前者（t=9.437， P＜0.01）。结论初步研究表明外显子33缺失可改变FAK的亚细胞定位；并能增强肿瘤细胞株的体外克隆形成能力，这种FAK突变体可能参与肿瘤的发生发展。