体外操作对小鼠精子参数及内源性ROS的影响

目的:研究体外物理操作对小鼠精子回收率、活动精子百分比、膜完整率以及细胞内活性氧簇(DCFm)的影响,探索最佳的小鼠精子体外处理方法.方法:采用不同离心力及离心时间(200,400,600,800×g;5,10,15,20 min),1 mL微量加样器不同抽吸次数(2,4,6,8,10次)以及不同Percoll密度梯度离心条件(600,800,1 000,1 200×g;15,30min)处理小鼠精子,探讨导致各指标变化的原因以及最优的处理条件.结果:析因分析结果提示,离心力及离心时间双重因素影响离心操作时精子回收率以及Percoll密度梯度离心活动精子百分比(P＜0.05);离心力单一因素影响离心操作时活动精子百分比以及Percoll密度梯度离心精子膜完整率(P＜0.05);加样抽吸操作可影响精子膜完整率以及活动精子百分比(P＜0.05).离心操作时,当离心力大于600×g时活动精子百分比下降(P＜0.05);加样器抽吸小鼠精子4次以上,小鼠精子膜完整率、活动精子百分比均下降(P＜ 0.05);Percoll密度梯度离心时间30 min,离心力达到800×g以上活动精子百分比与对照组比较升高(P＜0.05),离心力达到1 000×g以上时精子膜完整性与对照组比较降低(P＜0.05).各组存活精子DCFMF-1无变化(P＞0.05).结论:在小鼠精子离心时,离心力应控制在600×g以下;抽吸时次数应控制在4次以下;Pereoll密度梯度离心最优条件为800×g 30 min.