人脐带间充质干细胞来源的外泌体减轻肝脏缺血再灌注损伤及机制的初步研究

目的 探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体(hucMSCs-exo)对肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是否具有保护作用及可能的作用机制.方法 利用贴壁法提取原代人脐带间充质干细胞(hucMSCs),超速离心方法提取细胞培养上清中的外泌体,分别进行鉴定;在体外实验中利用L02细胞缺氧复氧损伤模型探究hucMSCs-exo对细胞凋亡蛋白表达水平的影响;在体内实验中建立C57BL/6小鼠70％ HIRI模型,72只小鼠随机分成四组,分别为Sham组(n=18)、IRI组(n=18)、PBS组(n=18)和exo组(n=18).术后第6h (n=6)、12h(n=6)及24 h(n=6)通过检测血清AST及ALT水平、进行肝脏HE染色及CASPASE-3免疫组化实验,进一步探究hucMSCs-exo对HIRI的作用,多组组间比较采用方差分析.结果 首先成功分离提取原代hucMSCs及hucMSCs-exo并进行鉴定;在体外,通过Western Blot实验证明hucMSCs-exo可降低L02细胞缺氧复氧(1％O2缺氧6h,复氧2h)损伤后细胞凋亡蛋白cleaved-CASPASE-3及cleaved-PARP表达水平;在体内,hucMSCs-exo处理后血清转氨酶水平较IRI组有所降低,这种差异在再灌注12h的AST[(2895.0±998.6) U/L vs (971.8±797.8) U/L,t=4.010,P=0.004]及再灌注24 h的AST[(1926.0±377.2) U/L vs(597.2±524.8) U/L,t=5.231,P=0.000]、ALT[(2074.0±750.3) U/L vs (555.3±493.8) U/L,t=4.379,P=0.002]中具有统计学意义,肝脏HE染色及肝组织CASPASE-3免疫组化结果同样提示hucMSCs-exo可减轻C57BL/6小鼠70％HIRI.结论 HucMSCs-exo可通过抗凋亡机制减轻HIRI,这为临床缓解HIRI提供新的治疗方向,其具机制有待进行更深入的研究.