重组汉逊酵母表达的HBsAg P24亚基间二硫键桥联程度等生化性状分析

目的 分析重组汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)表达的HBsAg(HP-HBsAg)P24亚基间二硫键桥联程度等生化性状.方法 采用蔗糖垫层离心法检测HBsAg的浮力密度,SDS-PAGE分析HBsAg P24亚基间结合程度的变化,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析HBsAg VLP在硫氰酸盐处理前后百分含量的变化.以酿酒酵母(Saccharomyces cervesiae,SC)表达的HBsAg(SC-HBsAg)作为对照.结果 HP-HBsAg的浮力密度为(1.085±0.014) g/ml,与SC-HBsAg的浮力密度[(1.090±0.009) g/ml]接近.SDS-PAGE分析表明,未经硫氰酸盐处理时,HP-HBsAg不能进入分离胶,而SC-HBsAg能进入分离胶;经硫氰酸盐处理后,HP-HBsAg和SC-HBsAg均不能进入分离胶.HPLC分析表明,流动相中含SDS时,HP-HBsAg VLP的百分含量在经硫氰酸盐处理前后变化不明显,SC-HBsAg VLP的百分含量在经硫氰酸盐处理后较处理前升高;在经硫氰酸盐处理前后,HP-HBsAgVLP的百分含量均高于SC-HBsAg.结论 HP-HBsAg的浮力密度与SC-HBsAg相近,HP-HBsAg P24亚基间二硫键桥联程度较高,结合紧密,不需要经硫氰酸盐处理.