抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

目的 制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.方法 将重组质粒pGEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E.coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 FastFlow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4.以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性.结果 筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204 800、1∶204 800、1∶3200.经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PE-Cy5.5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC.结论 成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础.